SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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RTD6123
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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
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50次
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● 產(chǎn)品組成：
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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AC2913-01
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30%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS0588-01
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1M Tris-HCl pH8.8
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100 ml
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RT
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TS0568-15ml
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1M Tris-HCl pH6.8
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15 ml
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RT
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SD050-5ml
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10% SDS
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5 ml
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RT
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AP020P
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10% APS（干粉）
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5 ml
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RT 配制后-20℃貯存
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介：
本公司提供的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒包含凝膠制備所需的全部試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒不僅可用于配制SDS-PAGE凝膠，也可用于配制非變性(Native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制至少30-50塊常規(guī)大小的PAGE膠。
● 貯存、運(yùn)輸及效期：
按照標(biāo)簽溫度貯存；常溫運(yùn)輸；有效期一年。
● 使用說明：
一 配制分離膠：
根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度（表一）。
表一 不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍：
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SDS-PAGE分離膠濃度
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最佳分離范圍
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6%
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50-350kD
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8%
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35-300kD
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10%
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20-150kD
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12%
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15-100kD
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15%
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10-80kD
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配制分離膠前，根據(jù)以下配方準(zhǔn)備10% APS：
10% APS配制-5 ml：將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯?，每次取一管使用?0% APS應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10% APS。
制備分離膠步驟：
1．參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。
2．根據(jù)表二，將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；先后加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝膠表面保持平整。
4．靜置15-20分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分離膠配方表
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組份
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不同凝膠體積對應(yīng)各組份的取樣量（ml）
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6％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
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H2O
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2.05
|
4.1
|
6.15
|
8.2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
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30％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
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12％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2
|
4
|
6
|
8
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
0.5
|
1
|
1.5
|
2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2.5
|
5
|
7.5
|
10
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
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注：如果配制非變性膠，參考上述配方，不加10% SDS即可配制成非變性PAGE膠。
二 濃縮膠制備：
1．去除覆蓋在分離膠上的水層。
2．按照表三將不同成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；先后加入TEMED和10%過硫酸銨，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
4．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
5．靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長。可以根據(jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
表三 SDS-PAGE濃縮膠(5%)配方表
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組份
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不同凝膠體積對應(yīng)各組份的取樣量（ml）
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2
ml
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4
ml
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6
ml
|
10
ml
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|
H2O
|
1.4
|
2.7
|
4.1
|
6.8
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1M Tris-HCl pH6.8
|
0.25
|
0.5
|
0.75
|
1.25
|
|
30％ PAA（29:1）
|
0.33
|
0.67
|
1
|
1.7
|
|
10% SDS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
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