10bp
DNA ladder
● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTM443
50次 (250 μl)
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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RTM443-01
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10bp DNA ladder
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50次（250 μl）
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DL070-01
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6×Native-PAGE DNA上樣緩沖液
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1 ml
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品是由8條帶狀雙鏈DNA條帶組成的精準(zhǔn)定量Marker，8條帶的大小分別為10，15，20，25，30，40，50，100bp。其中25 bp條帶為加亮帶，含量為100 ng/5 μl，其余條帶濃度為50ng/5μl。本產(chǎn)品為雙鏈DNA Marker，適用于非變性的PAGE電泳，不適用于尿素PAGE電泳。由于片段長(zhǎng)度很短，不建議用瓊脂糖凝膠電泳分離。
按照每次上樣5μl計(jì)算，該產(chǎn)品可以使用50次。
● 儲(chǔ)存、效期及運(yùn)輸條件：
-20℃ 貯存;有效期3年；濕冰運(yùn)輸。
● 使用方法：
一、 TBE-PAGE凝膠分離：
1、制備凝膠步驟：
1.1參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。
1.2按照表一將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；最后加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
注：10 bp DNA ladder 適用于配制20%TBE-PAGE膠。
1.3在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇，使凝膠表面保持平整。
1.4靜置10-20分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說明凝膠已聚合
表一 TBE-PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于1mm厚度小板膠)
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各組份體積（ml）
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最佳DNA分離范圍
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凝膠濃度
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滅菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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70-450 bp
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6%
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3
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1.0
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1.0
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0.05
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0.005
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60-460 bp
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8%
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2.66
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1.34
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1.0
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0.05
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0.005
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50-300 bp
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10%
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2.33
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1.67
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1.0
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0.05
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0.005
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40-200 bp
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12%
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2
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2.0
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1.0
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0.05
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0.005
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25-150 bp
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15%
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0.5
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2.5
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1.0
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0.05
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0.005
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5-100 bp
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20%
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0.66
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3.34
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1.0
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0.05
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0.005
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1.5去除覆蓋在分離膠上的乙醇；按照表二將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；最后加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
表二 TBE-PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml，適用于1mm厚度小板膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠濃度
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滅菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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4%
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1.0
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0.2
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0.3
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0.02
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0.002
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1.6將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端；將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
1.7靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
2、電泳：
2.1 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入1×TBE電泳液，1 ml吸頭沖洗加樣孔1-2次。
2.2 取待測(cè)樣品，加入相應(yīng)體積6×Native PAGE DNA上樣緩沖液，如5 μl樣品加1 μl 上樣緩沖液，短暫離心后取5-10 μl上樣。 10 bp
DNA ladder 1 mm厚10齒梳子上樣5 μl，其余梳齒和厚度凝膠適量調(diào)整上樣量。
2.3 連接電源線，打開電源開關(guān)。200 V穩(wěn)壓電泳，至溴酚藍(lán)指示前沿距離玻璃下沿1 cm時(shí)結(jié)束電泳。
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TBE-PAGE電泳
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恒電壓
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起始電流
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結(jié)束電流
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電泳時(shí)間
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200
V
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20-25 mA/板膠
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10-15
mA/板膠
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50+min
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20%T3.3C TBE-PAGE
3、染色：
3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。
3.2 染色液配制：
TBE-PAGE膠可以使用EB或RealSafe類染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（貨號(hào)：GR002）進(jìn)行染色。即用型染色液配制：
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即用型RealSafe核酸染色液
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100 ml
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1×TBE
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100 ml
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RealSafe Red核酸染料
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20 μl
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3.3染色和觀察：
凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm染色30 分鐘。紫外光下觀察。
4、實(shí)驗(yàn)示例：
20％TBE-PAGE電泳
左1-7：10,15,20,25,30,40,50
bp
右1：10
bp DNA ladder
凝膠長(zhǎng)度8 cm
電壓200 V 起始電流25
mA，終止電流13 mA
電泳緩沖液：1×TBE
電泳時(shí)間：50分鐘
染色：RealSafe Red核酸染料后染30分鐘
使用RTM443 10bp DNA ladder產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2021 IF=8.025] A method for
high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids
and proteins.
Marker :RTM443，10bp DNA ladder
Author: Lili
Chang , Dan Wang, Cunzhi Peng, Qi Wang, Bingqiang Xu, Zheng Tong
Journal: International
Journal of Biological Macromolecules 231 (2023) 123358
Institution：Key
Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops, Institute of
Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural
Sciences
Paper
link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358
2. [2022 IF=6] A novel fuorescent sensor
based on aptamer recognition and DNA walker amplication strategy and its determination of 17b-estradiol.
Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang,
LingMei Niu
Marker: RTM443，10bp DNA ladder
Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.
Institution：School
of Public Health, Hebei Medical University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340
