RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
● 產(chǎn)品貨號(hào)及規(guī)格：
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貨號(hào)
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包裝
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貯存
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RTR2103-01
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50次×20μl
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-20℃
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● 產(chǎn)品組成：
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組成
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包裝
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5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix
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200 μl
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gDNA Remover
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50 μl
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10×gDNA Remover Buffer
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100 μl
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RNase-free H2O
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1 ml
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄需要的全部試劑（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反應(yīng)
Buffer，Oligo (dT)18，Random primer）,濃度為5×。進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)，只需加入模板和RNase Free H2O 即可高效合成第一鏈cDNA，大大簡(jiǎn)化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。本制品含有去基因組成分gDNA Remover，以RNA為模板進(jìn)行cDNA第一鏈合成時(shí)，可以同步去除基因組DNA污染，與傳統(tǒng)DNaseI消化對(duì)比，gDNA Remover消化后無需加入EDTA進(jìn)行失活；反應(yīng)結(jié)束后，65℃加熱2分鐘，就可以不可逆失活。具有快速簡(jiǎn)便、重復(fù)性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了 RNase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA。 同時(shí)經(jīng)過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受50℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開 RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜 RNA 模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄 cDNA的長(zhǎng)度（可以獲得12 kb cDNA）和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可廣泛用于 2nd
Strand 的合成、 雜交、 PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR 反應(yīng)等。
● 貯存和運(yùn)輸：
開封后-20℃貯存兩年；濕冰運(yùn)輸。
● 使用方法：
一. 去除基因組DNA污染：
1.1冰上配制如下體系：
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組份
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加入體積
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Total
RNA/mRNA
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100ng-2μg(＜8
μl)
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gDNA
Remover
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1μl
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10×gDNA
Remover Buffer
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1
μl
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RNase-free
H2O
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up
to 10 μl
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1.2輕柔混勻，快甩離心，37℃處理 2 min，去除基因組污染，冰上放置。
注：若RNA中基因組DNA污染嚴(yán)重，可以延長(zhǎng)37℃處理5
min。
1.3
65℃處理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。
二. 第一鏈cDNA合成（反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)）：
2.1冰上配制如下體系：
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組份
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加入體積
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步驟1中的反應(yīng)液
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10
μl
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5×RTScript
1st Strand cDNA Synthesis MasterMix
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4
μl
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RNase-free
H2O
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6
μl
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2.2
反轉(zhuǎn)錄：輕柔混勻，快甩離心； 50℃孵育15 min，
2.3
終止反應(yīng)：85℃孵育 5 min，終止反應(yīng)。
反應(yīng)產(chǎn)物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃
保存，長(zhǎng)時(shí)間保存建議-80℃ 放置。
● 注意事項(xiàng)：
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix中已經(jīng)包含Oligo (dT)18和Random primer，不僅適用于包含poly(A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA，也適用于不含poly(A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。