1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
產品編號
|
產品名稱
|
規(guī)格
|
|
TB1030P
|
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
10×1升
|
● 簡介：
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）可以用于Western時濕轉轉膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。為方便客戶使用，1×轉膜緩沖液（粉末型）中沒有添加甲醇和SDS，客戶根據(jù)需要配制1×轉膜緩沖液時自行添加。
● 保存、運輸和貯存：
常溫保存，有效期兩年。配成溶液后建議4℃保存，有效期6個月。
加入甲醇或/和SDS的1×即用型轉膜緩沖液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，不建議保存。
● 1×即用型轉膜緩沖液配制方法：
|
|
|
1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
|
|
|
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
一袋粉末
|
|
|
超純水
|
約600
ml
|
|
|
|
變性蛋白
|
非變性蛋白
|
|
＜20 kD蛋白
|
無水甲醇
|
20%
|
5-10%
|
|
SDS
|
0.01%
|
0.01%
|
|
20-80 kD蛋白
|
無水甲醇
|
10%
|
0-5%
|
|
SDS
|
0.05%
|
0.05%
|
|
＞80 kD蛋白
|
無水甲醇
|
10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
|
0%
|
|
SDS
|
0.1%
|
0.1%
|
|
|
超純水
|
定容至1升，不要調節(jié)pH，pH~8.3
|
注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結合在膜上，而SDS讓蛋白更加離開膜。因此對大蛋白轉膜來說，多加SDS，少加甲醇；而對小蛋白轉膜，多加甲醇，少加SDS。
● 轉膜：
1. 膜的選擇：轉膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來，大于20 kD蛋白選擇0.45
μm孔徑，低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。
蛋白轉膜三明治制作：
負極（電轉夾黑色面）-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白色面）
3. 轉膜條件：
以下轉膜條件僅供參考，客戶針對自己的目的蛋白，最好經過1-2次預實驗后，確定最佳的轉膜條件。
|
膜孔徑
|
蛋白大小
|
穩(wěn)流
|
建議時間
|
降溫措施
|
|
0.22 μm
|
低于20 kD
|
200 mA
|
~30分鐘
|
不需要
|
|
0.45 μm
|
20-50 kD
|
300 mA
|
~45分鐘
|
需要
|
|
0.45 μm
|
50-200 kD
|
350 mA
|
~50分鐘
|
需要
|
|
0.45 μm
|
高于200
kD
|
350 mA
|
~2.5-4.5小時
|
需要
|