PCR反應試劑盒 ( 2000bp )
貨號：RTC3105
● 簡介：
本試劑盒包含完成PCR反應所需全部試劑，可進行PCR實驗的教學和科研。其中模板為質(zhì)粒DNA；引物為根據(jù)質(zhì)粒DNA序列設計的上、下游引物；2×Taq
PCR MasterMix包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑。使用時，只需補加實驗所需的引物和模板后即可進行PCR反應，可最大限度的減少人為誤差，具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。使用本試劑盒進行PCR反應后，PCR產(chǎn)物大小應為2000bp。
● 貯存：-20℃。有效期一年。
● 包裝：20次
● 試劑盒組成：
|
組成
|
濃度
|
體積
|
|
模板
|
10
ng/μl
|
30
μl
|
|
上游引物（2000
FW）
|
10
μM
|
30
μl
|
|
下游引物（2000
RV）
|
10
μM
|
30
μl
|
|
2×Taq
PCR MasterMix(含染料)
|
-
|
2×500
μl
|
|
去離子水
|
-
|
1
ml
|
● 實驗步驟：
1.
冰浴中徹底融化模板，引物和2×Taq
PCR MasterMix，混勻后快甩離心將溶液收集到管底。
2.
按照下表在0.2ml
PCR管中制備反應體系：
|
|
50μl反應體系
|
|
上游引物（2000FW） 10μM
|
1 μl
|
|
下游引物（2000RV） 10μM
|
1 μl
|
|
模板
|
1 μl
|
|
2×Taq
PCR MasterMix
|
25 μl
|
|
水
|
22 μl
|
3.
快甩離心將反應液收集到管底。
4.
PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話，補加25μl礦物油。
5.
PCR儀上執(zhí)行以下程序：
|
步驟
|
溫度
|
時間
|
循環(huán)數(shù)
|
|
初始變性
|
94℃
|
5 min
|
1
|
|
變性
|
94℃
|
30 sec
|
30
|
|
退火
|
54℃
|
30 sec
|
|
延伸
|
72℃
|
2 min
|
|
最后延伸
|
72℃
|
5 min
|
1
|
6. 反應完成后，取5ml反應液，1％瓊脂糖凝膠電泳，觀察條帶情況。