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16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠 通用型 U型玻璃板

16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠 通用型 U型玻璃板

產(chǎn)品編號:RTD6115-0016

產(chǎn)品規(guī)格:10板/盒

數(shù)量
價格 ¥1200

16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠(通用型 U型玻璃板)

Ver.750167

貨號

名稱

規(guī)格

RTD6115-0016

16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠 通用型 U型玻璃板

10/

產(chǎn)品簡介:

RealPAGE Tricine預(yù)制膠可以用來檢測2.5-40 kD的多肽大小。預(yù)制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm,凝膠尺寸8.2×7.2 cm,凝膠厚度1.1 mm,梳子12齒,最大上樣體積30 μl,兼容伯樂電泳槽。

● 貯存、運(yùn)輸和效期

4-8度貯存(切勿冷凍);常溫運(yùn)輸;有效期1個月。

使用說明:

. 電泳緩沖液配制:

10×Tris-Tricine-SDS緩沖液(10×TTS)配制:

將10×Tris-Tricine-SDS緩沖液粉末(Cat No:CB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500 ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調(diào)節(jié)pH,即配成500 ml 10×TTS緩沖液。

1×TTS緩沖液配制

 

1×TTS配制量 500 ml

1×TTS配制量 1000 ml

10×TTS

50 ml

100 ml

超純水

450 ml

900 ml

注:10×Tris-Tricine-SDS緩沖液配方[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; ~pH 8.3]:

Tris堿121.14g;Tricine 179.2g;SDS 10 g,用蒸餾水溶解,定容至1000 ml(不用調(diào)pH),4-8℃貯存,使用前稀釋成1×緩沖液使用。

. 樣品處理(變性還原樣品):

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat:TP050]等體積混合,95處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液,根據(jù)說明書上樣(預(yù)染Marker不能加熱處理,非預(yù)染Marker上樣前一般要95處理5分鐘)。

. 電泳:

3.1 拆開預(yù)制膠包裝,將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。


注:伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向(左圖)。六一其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。


3.2 將電泳槽的內(nèi)槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過處理)加入點(diǎn)樣孔,穩(wěn)壓電泳(表1),至藍(lán)色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要150 min。

1 多肽電泳條件

 

電壓

電流變化

電泳時間

濃縮膠

恒壓80 V

起始電流:30-35 mA

終止電流:25-30 mA

~20 min

 

 

注:等待樣品指示前沿到達(dá)分離膠上沿時,調(diào)高電壓

 

分離膠

恒壓120 V

起始電流:40-45 mA

終止電流:15-20 mA

~130 min

 

 

注:恒壓條件下,電流不可調(diào)節(jié),電流是逐漸降低的,觀察記錄電流數(shù)值。

 

. 染色:(使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202

4. 1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),蛋白條帶含量高于1μg的,染色1-2分鐘即可見。

4.2 搖床上常溫?fù)u動10-15分鐘,至條帶清晰可見滿足實驗要求后停止染色。

4.3 蒸餾水漂洗凝膠,在蒸餾水中脫色搖動10-15分鐘,至凝膠基本無藍(lán)色背景,拍照記錄結(jié)果。

. 轉(zhuǎn)膜:

多肽轉(zhuǎn)膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜(用前用甲醇處理潤濕)或0.22 μm NC膜。

5.1 半干轉(zhuǎn):

使用伯樂Trans-Blot Turbo半干轉(zhuǎn)機(jī)器請選擇配套的5×RealBlot快速半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液(貨號:RT5030)。轉(zhuǎn)膜推薦條件:一板小型凝膠(8×10 cm)恒流,1.3 A,7-10 min。

5.2 濕轉(zhuǎn):

濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液:25 mM Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3;

轉(zhuǎn)膜條件:恒流200-300 mA  40-60 min


實驗示例:


 
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