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2×pfu PCR MasterMix 含染料

2×pfu PCR MasterMix 含染料

產(chǎn)品編號(hào):RTH3104-02

產(chǎn)品規(guī)格:500μl

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥100

2×pfu PCR MasterMix

 產(chǎn)品包裝:

 

 

目錄號(hào)

包裝

2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

RTH3103-02

500μl

RTH3103-03

5×500μl

2×pfu PCR MasterMix(含染料)

RTH3104-02

500μl

RTH3104-03

5×500μl

注:以50μl PCR反應(yīng)體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20 50μl PCR反應(yīng)。

 儲(chǔ)存條件: -20℃可長(zhǎng)期保存;4℃穩(wěn)定貯存3個(gè)月。經(jīng)常使用時(shí),一旦融化后請(qǐng)4℃貯存,盡量避免反復(fù)凍融。

 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本產(chǎn)品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為2×。使用時(shí),只需補(bǔ)加實(shí)驗(yàn)所需的引物和模板后即可進(jìn)行PCR反應(yīng),可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。用于高保真的DNA片段的擴(kuò)增。使用該產(chǎn)品得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通過(guò)平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。

 質(zhì)量控制:

以λ DNA為模板,可以很好擴(kuò)增5kb的DNA片段;以水稻基因組為模板,可以很好擴(kuò)增3.2kb的DNA片段。

●  使用說(shuō)明:

1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后Minispin將溶液收集到管底。

2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系:

 

50μl反應(yīng)體系

終濃度

2×MasterMix

25μl

上游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

下游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

模板

× μl

10pg-1μg

補(bǔ)至50μl

 

3. 快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。

4. PCR儀如果沒(méi)有熱蓋加熱的話,補(bǔ)加25μl礦物油。

5. PCR儀上執(zhí)行以下程序:

步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

初始變性

94

5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

0.5kb/min

最后延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長(zhǎng)短等具體情況,設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間等)。

6. 電泳檢測(cè)。

 注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。



1% agarose gel,RealSafe Red stain
lane 1: 1800bp,Rice fragement
lane 2: 1000bp, plasmid fragement
lane 3: 500bp, plasmid fragement


 
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