RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預(yù)制膠
|
名稱
|
規(guī)格
|
|
RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預(yù)制膠（12孔）
|
10板/盒
|
● 產(chǎn)品介紹：
RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預(yù)制膠適用于20-2,000 bp雙鏈DNA或20-2,000 nt單鏈DNA的核酸電泳，適合用于 DNA電泳應(yīng)用領(lǐng)域，包括分析限制性酶切、PCR產(chǎn)物、DNA印跡分析和引物分析。是一款安全、快捷、高性能的預(yù)制凝膠，即開即用無需自行配置各種試劑及灌膠操作，核酸條帶均一性好，分辨率高。兼容市場上主流的 mini 電泳槽， 如 Bio-Rad，天能，六一和君意東方等。
產(chǎn)品參數(shù)：
預(yù)制膠板尺寸：長10 cm，寬8.2 cm，厚度為4 mm
預(yù)制膠尺寸：長 8.2 cm，寬 7.2 cm，厚度為1.1 mm
梳孔：12 孔
包裝規(guī)格：10板/盒
最大上樣量：30 μl（12 孔）
● 產(chǎn)品貨號及選擇：
|
貨號
|
分離膠濃度
|
孔數(shù)
|
最大上樣量
|
電泳緩沖液
|
最佳分離范圍
|
溴酚藍位置
|
|
RTH5101-0005
|
5%
|
12
|
30 μl
|
1×TBE
|
200-2000 bp
|
~70 nt
|
|
RTH5101-0010
|
10%
|
12
|
30 μl
|
1×TBE
|
50-1500 bp
|
~35 nt
|
|
RTH5101-0015
|
15%
|
12
|
30 μl
|
1×TBE
|
20-1000 bp
|
~20 nt
|
● 貯存、效期及運輸：
預(yù)制膠4-8℃貯存，切勿置于0oC以下冷凍；有效期30天；常溫運輸。
● 使用說明：
一. 樣品準備：
1.1 DNA樣品按照5：1體積加入6×非變性PAGE DNA上樣緩沖液（貨號：DL070），混勻后上樣。 建議每孔上樣0.2-0.5 μg左右即可。
1.2 TBE- PAGE非變性電泳雙鏈DNA Marker可以選擇10 bp DNA ladder（10-100 bp）（貨號：RTM443）或20 bp DNA ladder（20-500 bp）（貨號：RTM441）或25 bp DNA ladder（25-500bp）（貨號：RTM444）作為分子量標準；單鏈DNA Marker可以選擇單鏈DNA Marker（20-75 nt）非預(yù)混型（貨號：RTM507）或單鏈DNA Marker（10-75 nt）非預(yù)混型（貨號：RTM509）。
二. 電泳液的準備：
取 5×TBE（貨號：TB001），加入去離子水稀釋為1×，制備成1×TBE buffer或自行配制1×TBE。1×TBE電泳緩沖液配制方法：
|
終濃度
|
順序
|
原料
|
1升
|
5 升
|
|
89 mM
|
1
|
Tris堿 [MW121.14]
|
10.8 克
|
54克
|
|
2 mM
|
2
|
EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
|
0.744 克
|
3.72克
|
|
89 MM
|
3
|
硼酸 [MW61.83]
|
5.5 克
|
27.5克
|
|
|
4
|
超純水最后定容至
|
1 升
|
5 升
|
|
|
|
最后pH在8.2-8.3之間，可以不用調(diào)節(jié)pH，記錄每批pH
|
三. 電泳：
3.1 將預(yù)制膠從包裝袋中取出，裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（如圖）。六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。
3.2內(nèi)槽加滿電泳液，外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次。
3.3 上樣：在梳孔內(nèi)加入適當濃度和體積的樣品。建議每孔上樣0.2-0.5 μg左右即可。
注：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量較易導(dǎo)致條帶拖尾。
3.4 將電泳槽蓋子蓋好，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅，黑對黑)。一般在150V電壓，電泳50-90分鐘，根據(jù)溴酚藍的位置大體判斷條帶大小位置，停止電泳。
|
|
恒電壓
|
起始電流
|
結(jié)束電流
|
電泳時間
|
適用條件
|
|
推薦電壓
|
150V
|
15-20 mA/板膠
|
5-10 mA/板膠
|
60+ min
|
最佳電壓，最優(yōu)的分辨率
|
|
非變性膠濃度
|
溴酚藍
|
二甲苯菁
|
|
5%
|
~70 nt
|
~250 nt
|
|
10%
|
~35 nt
|
~120 nt
|
|
15%
|
~20 nt
|
~75 nt
|
3.5 取出玻璃膠板，稍加用力慢慢扳開或用刮板輕輕撬開玻璃膠板，將凝膠取出。
四. 染色：
使用核酸染料染色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核酸染料結(jié)合核酸效果最佳，強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。
以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進行染色。
4.1 漂洗：拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。
4.2 染色液配制：
|
即用型RealSafe Red核酸染色液配制
|
|
1×TBE
|
|
|
RealSafe Red核酸染料
|
10-20 μl
|
4.3 染色：
凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm 染色30 分鐘。
4.4 觀察：
紫外燈或藍光儀上觀察條帶。
● 實驗示例：
